Mol Psychiatry：徐富强/王杰团队实现星形胶质细胞活体成像

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近日，徐富强研究员团队（中科院精密测量院/深圳先进院）在Nature子刊Molecular Psychiatry杂志上发表题为“In vivo Imaging of Astrocytes in the Whole Brain with Engineered AAVs and Diffusion Weighted Magnetic Resonance Imaging”的研究成果。自2016年起，团队在徐富强研究员和王杰研究员的带领下，联合磁共振成像与病毒基因改造技术率先提出一种新型基因编码生物磁共振成像技术，逐步实现神经元网络（Neuroimage, 2019; Human Brain Mapping, 2021）和星形胶质细胞（Molecular Psychiatry, 2022）在体水平的无创检测。本研究中，团队基于基因编码生物磁共振成像技术，首次建立了一种在体无创全脑检测星形胶质细胞的新技术。

星形胶质细胞是哺乳动物中枢神经系统（Central nervous system, CNS）中含量最丰富、分布最广、胞体最大的一种神经胶质细胞。星形胶质细胞具有多种至关重要的生物学功能，其功能异常参与多种疾病的致病过程。然而，星形胶质细胞形态不均且高度复杂，在同一脑区或不同脑区之间均有不同，且在生理和病理状态下也是动态变化的。因此，全脑维度无损检测并跟踪星形胶质细胞的动态变化相关技术的研发迫在眉睫。研究团队通过整合重组腺相关病毒载体（rAAV）和磁共振成像活体检测的优势，逐步在细胞水平、脑区水平及全脑水平实现星形胶质细胞的活体无损检测（图1）。

图1.  全脑无损检测星形胶质细胞的研究策略

rAAV是近年来发展极为迅速的一类工具病毒，是研究神经科学相关问题和基因治疗的重要载体。团队首先对rAAV工具病毒的衣壳蛋白进行突变改造，并利用人类胶质纤维蛋白的启动子GFAP构建rAAV载体，提升了病毒工具在星形胶质细胞上转导效率（图2）。

图2. AAV病毒载体突变位点示意图及重组改造后特异性标记星形胶质细胞效果

另外，水通道蛋白（Aquaporin, AQP）是一组高度保守的跨膜转运蛋白，对水具有高度选择通透性。过表达AQP1蛋白可产生弥散加权成像（Diffusion-weighted imaging，DWI）信号的改变，因而水通道蛋白基因可作为磁共振成像报告基因。团队继续对病毒载体rAAV2/5和rAAV2/PHP.eB进行优化改造，使其同时携带水通道蛋白报告基因和荧光元件，构建新型工具病毒，逐步实现脑区和全脑水平的星形胶质细胞的无创活体成像。在全脑成像研究中，团队构建可高效通过血脑屏障的新型rAAV2/PHP.eB-AQP1-EGFP工具病毒，利用尾静脉注射技术将该病毒注入小鼠体内，在病毒表达两周和三周后分别进行MRI活体成像，最终利用荧光成像对活体成像效果进行评估（图3）。结果显示，该新型基因编码生物磁共振成像技术不仅可实现星形胶质细胞的活体全脑成像，而且其成像时间适用于常用的光遗传学/药理遗传学相关研究。

图3. 活体全脑星形胶质细胞成像及其荧光成像效果验证

全脑维度星形胶质细胞的新型检测技术的开发将有助于加强对星形胶质细胞功能的理解，提升对其在调控整个中枢神经网络中的认识，为研究神经系统疾病的致病机制和治疗靶点提供了新思路。另外，该技术可应用到疾病模型小鼠相关的星形胶质细胞异常的相关机制研究，为此类疾病的早期预防起到了重要作用。

本研究的共同第一作者是深圳先进技术研究院李梅博士后和精密测量院的柳壮博士生，通讯作者是精密测量院王杰研究员和徐富强研究员；团队非常感谢精密测量院韩增鹏、王起恬、金鼎瑜和安萍萍及西北民族大学刘雅婷对于本项目的相关帮助，该项目获得国家自然科学基金等项目的支持。

该项目所涉及的病毒工具均可从布林凯斯（深圳）生物技术有限公司直接获得。

研究论文链接：https://www.nature.com/articles/s41380-022-01580-0

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